Собранные с конца осени, зимой или ранней весной до начала распускания и высушенные боковые (пазушные) и верхушечные (терминальные) почки тополя черного - Populus nigra L., тополя бальзамического - Populus balsamifera L., тополя канадского - Populus canadensis Marsh., тополя лавролистного - Populus laurifolia Ledeb. и тополя душистого - Populus suaveolens Fisch., сем. ивовых - Salicaceae.
Внешние признаки. Цельное сырье. При рассмотрении под лупой (10×) или стереомикроскопом (16×) почки вытянутые, конические, заостренные с округлым основанием, на ощупь клейкие. Верхушечные (терминальные) почки имеют яйцевидно-удлиненную форму и заостренную верхушку. Боковые (пазушные) почки имеют коническую форму с округлым основанием. Длина почек от 7 до 25 мм, в поперечнике - от 2 до 9 мм. С поверхности - почки гладкие, блестящие, у краев чешуи - смолистые. Чешуи располагаются по спирали, нижние коричневого цвета - мелкие, округлые, жесткие; верхние - более светлые с зеленоватым оттенком, крупные овальные, конически заостренные. Верхушечные почки имеют 9-12 кроющих чешуи, боковые - 5-7. Края чешуи прилегают плотно, копчики (верхушки) нижних и средних чешуи слегка отогнуты.
Запах сладковатый, смолистый, усиливающийся при разламывании почки. Вкус водного извлечения характерный, жгуче-горький.
Микроскопические признаки. При рассмотрении чешуи почки с поверхности должно быть видно, что клетки эпидермиса наружной стороны слегка вытянутые, с неравномерно утолщенными клеточными стенками и простыми порами, а клетки эпидермиса Внутренней стороны - с тонкими прямыми стенками. На верхушке и по краям чешуи на клетках наружного эпидермиса встречаются простые одноклеточные толстостенные кутинизированные, часто обломанные волоски с гладкой поверхностью.
На поперечном срезе чешуи должен быть виден однослойный наружный эпидермис со слегка вытянутыми относительно продольной оси чешуи округлыми или шлемовидными клетками, стенки которых покрыты толстым слоем кутикулы и имеют четковидные утолщения. Внутренний эпидермис чешуи также однослойный, состоит из столбчатых клеток с тонкими стенками, некоторые клетки заполнены желтоватого цвета содержимым. Клетки внутреннего эпидермиса по краю чешуи - одревесневшие.
Под наружным и внутренним эпидермисом располагается пробка, представленная радиальными рядами клеток филлемы. Наиболее развита пробка в нижних чешуях, а также в верхушках верхних чешуи и центральной наружной части средних и верхних чешуи. У верхних чешуи встречается крайне слабо развитая (1-2 ряда клеток) наружная пробка, а внутренняя - часто отсутствует.
Основная ткань чешуи - рыхлая паренхима, состоящая из клеток с коричневым содержимым. В верхушках чешуи клетки паренхимы одревесневшие. В основной паренхиме чешуи встречаются группы склереид и друзы оксалата кальция.
Проводящие пучки - неполные и представлены в нижней и средней части чешуи трахеидами; в верхушках чешуи проводящие пучки отсутствуют.
На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флуоресцентным индикатором на алюминиевой подложке размером 10х15 см наносят 2 мкл испытуемого раствора (см. раздел "Количественное определение". Сумма фенольных соединений" приготовление раствора А испытуемого раствора) и 2 мкл раствора стандартного образца (СО) пиностробина (см. раздел "Количественное определение". Сумма фенольных соединений" приготовление раствора А СО пиностробина). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей хлороформ - спирт 96% (9:1), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.
На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции фиолетового цвета на уровне зоны адсорбции на хроматограмме раствора СО пиностробина.
Хроматограмму обрабатывают диазореактивом и выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100-105°С в течение 2 мин.
На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции желто-оранжевого цвета на уровне зоны адсорбции на хроматограмме раствора СО пиностробина, зона адсорбции оранжевого цвета ниже зоны пиностробина; допускается обнаружение других зон адсорбции.
Влажность. Цельное сырье - не более 8%.
Зола общая. Цельное сырье - не более 10%.
Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье - не более 1%.
Посторонние примеси
Веточки, в том числе отделенные при анализе. Цельное сырье - не более 10%.
Почки, тронувшиеся в рост и распустившиеся. Цельное сырье - не более 2%.
Органическая примесь. Цельное сырье - не более 1%.
Минеральная примесь. Цельное сырье - не более 0,5%.
Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".
Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".
Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".
Количественное определение. Цельное сырье: сумма фенольных соединений в пересчете на пиностробин - не менее 15%.
Сумма фенольных соединений
Приготовление растворов.
Раствор СО пиностробина. Около 0,02 г (точная навеска) СО пиностробина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 80 мл спирта 96%, растворяют при перемешивании на водяной бане при температуре 75°С. Затем содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (раствор А СО пиностробина).
1,0 мл раствора А СО пиностробина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (раствор БСО пиностробина).
Срок годности растворов 30 сут.
Около 1,0 г (точная навеска) цельного сырья помещают в колбу с притертой пробкой вместимостью 100 мл и прибавляют 40 мл спирта 96%. Колбу закрывают пробкой, взвешивают с погрешностью ±0,01 г, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 ч. Содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и доводят спиртом 96% до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (раствор А испытуемого раствора).
1,0 мл раствора А испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (раствор Б испытуемого раствора).
1,0 мл раствора Б испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (раствор В испытуемого раствора).
Измеряют оптическую плотность раствора В испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 289 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют спирт 96%.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б СО пиностробина в тех же условиях.
Содержание суммы фенольных соединений в пересчете на пиностробин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
,
где А - оптическая плотность раствора В испытуемого раствора;
- оптическая плотность раствора Б СО пиностробина;
а - навеска сырья, г;
- навеска СО пиностробина, г;
Р - содержание основного вещества в СО пиностробина. %;
W- влажность сырья, %.
Допускается содержание суммы флавоноидов в пересчете на пиностробин вычислять с использованием удельного показателя поглощения по формуле:
,
где А - оптическая плотность раствора В испытуемого раствора;
- удельный показатель поглощения пиностробина при длине волны 289 нм, равный 700:
а - навеска сырья, г;
W- влажность сырья, %.
Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".
Хранение. В соответствии с требованиями ОФС "Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".